亲和素-生物素系统，如何减少干扰，更好地用于免疫检测

1. 什么是亲和亦同-生物亦同系统才会

（链霉）亲和亦同-生物亦同是免疫监测中所常用的信号放大系统才会。亲和亦同是蛋清中所常见于的碳水化合物酶，由四个大致相同的复合物合组。每一个复合物都构成一个生物亦同紧密结合底物，因此一个理论上正常的亲和亦同只能紧密结合4个生物亦同。亲和亦同与生物亦同具非常强烈的可塑性，其解离常数大概是1.3*10-15M，是存留自然界中所最强的非共价彼此间作用之一。亲和亦同的氨基酸在结构上非常不稳定的，即使在含量极低8M的尿亦同溶剂中所，也只能依靠在结构上的正确性，保持对生物亦同的可塑性。并且在紧密结合生物亦同后，亲和亦同-生物亦同在结构上的不稳定的性进一步增强，研究暗示，即使在含量为8M的乙酸胍中所，亲和亦同-生物亦同复合物依然只能不稳定的假定。另外，亲和亦同-生物亦同的紧密结合与防体-防原的紧密结合类似，有极高的特异性，只能在繁复的溶剂环境中所彼此间紧密结合，因此，亲和亦同-生物亦同系统才会较广应用在免疫监测中所。其中所应用最为较广的方式也是将亲和亦同一个大在磁珠表面，生物亦同标识防体。

△生物亦同磁珠，生物亦同本土化防体免疫监测图表

2. 亲和亦同，链霉亲和亦同，以及中所性亲和亦同

亲和亦同酶是碱性糖酶，组分有约为67kDa，氨基酸等电点有约为10。由于氨基酸等电点较高，在pH中所性先行决条件下，亲和亦同带离子。并且亲和亦同假定寡糖成分（主要由碳水化合物和N-乙酰氨基合组的异质在结构上），容易与细胞表面、核苷酸、凝集亦同等物质激发非特异性紧密结合，造生产成本底过高的弊端。链霉亲和亦同是由链霉菌中所表达纯本土化出的酶，与亲和亦同类似，链霉亲和亦同也由CH合组，每个单体都可以以极高的可塑性紧密结合一个生物亦同。大致相同的是，链霉亲和亦同没糖链，组分比亲和亦同略少于，大概为53kDa，氨基酸等电点在6.8~7.5彼此间，非特异性表层也比亲和亦同要小很多。

另外一种较广用于的亲和亦同是中所性亲和亦同（NeutrAvidin）。中所性亲和亦同实际是去除糖链后的亲和亦同，组分有约为60kDa，氨基酸等电点为6.3。由于去除了糖链，中所性亲和亦同的非特性取得了很大的降低，同时又存留了亲和亦同对生物亦同极高的可塑性。

△几种亲和亦同的性质对比

3. 生物亦同及其酯在结构上

生物亦同又被称为维生亦同H，或者维生亦同B7，是一种醇类维生亦同，其功用是在人体内展开脂肪、糖、酶降解等极其重要物质的生本土化反应会。生物亦同较广假定与鸟类肝、肾、酵母、牛奶中所。

△生物亦同分子在结构上图

生物亦同组分有约为244，只能以阴离子的形式，标识在防体酶的表面，而不不良影响氨基酸的选择性。因此较广应用酶标识，进而通过亲和亦同-生物亦同系统才会对标识酶展开分立、富集、监测。

现在通过大致相同的改造方式也，生物亦同有各种各样的酯，生物亦同标识酶的技术也日趋成熟阶段。生物亦同酯在结构上基本上由生物亦同飞凤在结构上，甲酯侧链，每条后背，以及反应会基团合组。其中所每条后背的亲疏水浅，尺寸对于酶的标识高效率，标识后生物亦同与亲和亦同后续反应会性有极其重要不良影响。如链霉亲和亦同与生物亦同紧密结合底物是一个盘子型在结构上，高度大概有0.9纳米。因此，生物亦同的每条后背尺寸，直接不良影响到标识在酶表面的生物亦同是否只能进入亲和亦同反应会盘子中所。在某些应用中所，长每条后背的生物亦同具更高的分析敏感度。

△生物亦同酯在结构上图表

△常用生物亦同后背长及组分

4. 生物亦同电磁干扰

生物电磁干扰是亲和亦同-生物亦同系统才会监测中所普遍假定的弊端。采用亲和亦同-生物亦同系统才会展开免疫监测时，如果待测样本中所存如果假定高含量的游离生物亦同，将与生物亦同本土化防体竞争性紧密结合亲和亦同的紧密结合底物，进而不良影响监测结果。

作为醇类B族系维生亦同，生物亦同在人体内主要经过甲状腺降解。正常人体血液中所生物亦同含量之内大概在0.28~0.55ng/mL，数倍低于各类免疫监测乙酸盒中所声称的激发电磁干扰的生物亦同含量。但是日常足量生物亦同的老年人；也，根据一项统计数据，英美两国大概有15%的老年人日常足量生物亦同。而一篇刊载在ClinicalChemistry上的研究文献显示，正常人在口服100mg生物亦同后1.5全程，血液中所生物亦同含量达到峰值，平均为762.52ng/mL，24全程后，含量减少至平均71.59ng/mL，少于许多监测乙酸盒声称的生物亦同电磁干扰含量少于。而且依据大致相同的生物亦同肥胖症，以及大致相同监测乙酸的稳定性，口服生物亦同后对监测的电磁干扰可能会持续至48全程。

△亦同系统才会受生物亦同电磁干扰统计分析。（注，为英美两国FDA登记注册项目）

由于基本上不采用生物亦同亲和亦同系统才会，雅培的免疫监测乙酸长期以来以无生物亦同电磁干扰作为卖点之一。无论如何在2011年登记注册的维生亦同D监测乙酸中所，雅培采用了生物亦同标识的维生亦同D作为竞争性酯，与鼠防生物亦同防体标识的吖啶酯作为标识物展开监测，因此也才会在一定程度上受到生物亦同电磁干扰。

5. 防生物亦同电磁干扰的方法有

理论上所有采用亲和亦同-生物亦同系统才会的监测乙酸盒都才会受到生物亦同电磁干扰。目前有几种方法有可以降低生物亦同电磁干扰，或者降低乙酸对生物亦同电磁干扰的依赖性。

非常简单直接的方法有是降低亲和亦同的加入量，如大大降低亲和亦同磁珠的含量，以降低反应会框架对生物亦同的乘载，但是这种应该并不一定才会降低乙酸的生产成本，而且改善的程度有限。另外一种必需的方法有是日前将亲和亦同反应会物和生物亦同本土化反应会物日前预混，让亲和亦同先行与生物亦同本土化防体反应会，进而提高样本中所游离生物亦同对反应会的电磁干扰。确诊乙酸盒一般是采用链霉亲和亦同磁珠-生物亦同反应会框架，因此在解决生物亦同电磁干扰的弊端上，亦同公司长期以来在创新的发展，努力只能此前彻底解决这一弊端。例如，近日公布的一项专利显示，某一公司确诊联合开发出一种防生物亦同电磁干扰的防体，只能特异性紧密结合游离生物亦同，而对标识在防体表面的生物亦同不紧密结合，因此可以作为防电磁干扰反应会物添加至反应会框架中所，通过紧密结合样本中所游离的生物亦同而提高电磁干扰。另外一种方法有是采用防生物亦同防体替代亲和亦同类酶。如英美两国一家草创公司就联合开发出了特定的防生物亦同防体，其对生物亦同的可塑性与亲和亦同类酶相当，但是与游离生物亦同的可塑性则要低100兆。

-总结-

虽然生物亦同电磁干扰长期以来假定，也未取得完全解决。但是众多厂家依然在本土化学发光免疫监测中所用于（链霉）亲和亦同-生物亦同系统才会，一个理由是中期联合开发反复中所采用了此类模式，如果----或改变这种模式，无异于之后联合开发乙酸，优化科学仪器系统才会，并且需要之后展开登记注册提出申请，需要花费大量的物力，以及消耗非常长的时间。另一个理由是采用这种模式只能简本土化乙酸联合开发测试方法有，并且在一定程度上降低乙酸生产成本。不管出于何种理由，（链霉）亲和亦同-生物亦同系统才会依然较广应用免疫监测中所，但是生物亦同电磁干扰是一个不可忽视的弊端。